染色体步移技术(genome walking)是一种关紧的分子生物科学研讨技术,运用这种技术可以管用取得与已知序列相邻的未知序列。
染色体步移技术主要有以下几方面的应用:
①依据已知的基因或分子标记蝉联步移,取得人、动物和植物的关紧调节控制基因,可以用于研讨结构基因的表现调节控制。如离合克隆开始工作子并对其功能施行研讨;
②步查取得新物种中基因的非守旧地区范围,因此取得完整的基因序列;
③鉴定T-DNA或转座子的插进去位点,鉴定基因枪转基因法等转基因技术所造成的外源基因的插进去位点等;
④用于染色体测序办公中的窟窿眼儿填补,取得完整的基因组序列;
⑤用于人工染色体PAC、YAC和BAC的断片搭接。
对于基因组测序已经完成的少量物种(如人、小鼠、线虫、稻子、拟南芥等)来说,可以轻松地从数值库中找到某物种已知序列的翼侧序列。不过,对于大部分数有生命的物质而言,在不成解他们的基因组序列曾经,想要晓得一个已知地区范围两侧的DNA序列,只能认为合适而使用染色体步移技术。
以PCR技术为基础的染色体步移的主要问题是,电热恒温鼓风干燥箱在预先不成解未知地区范围序列信息的事情状况下,怎么样预设两个特别优异性引物来扩增未知地区范围。而传统的染色体步移办法,如:逆向PCR法、连署接头法等,都有操作复杂、非特别优异性扩增、连署速率劣等弊病。
TaKaRa新产品之Genome Walking Kit试药盒是一种依据已知基因组DNA序列,取得翼侧未知序列的试药盒。相对于其他传统办法,本试药盒具备、简单方便、特别优异性高、锐敏度高、一次性取得的未知序列较长等*的地方。其主要原理是依据已知DNA序列,作别预设三条同向且退火温度较高的特别优异性引物(SP Primer),与试药盒中供给的四种通过*特别预设的退火温度较低的兼并引物,即AP1、AP2、AP3、AP4施行热错误称PCR反响。
一般事情状况下真空干燥箱,那里面至少有一种兼并引物可以与特别优异性引物之间利用退火温度的差别施行热错误称PCR反响,经过三次巢式PCR反响即可取得已知序列的翼侧序列。假如一次实验取得的长度不可以满意实验要求时,还可以依据步移取得的序列信息,接着施行翼侧序列取得。这个之外,本试药盒中还包括Control DNA及Control Primer,可以便捷施行Control实验。